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健康成人全血的門控策略示例：

首先，使用 Time 和 SSC-A 進(jìn)行初步門控，以排除時(shí)間不一致的數(shù)據(jù)。接著，利用 FSC-A 和 SSC-A 門控排除碎片和噪音信號(hào)，然后通過 FSC-H 和 FSC-A 選擇單細(xì)胞事件，確保分析的對(duì)象是單個(gè)細(xì)胞。

接下來，通過 CD45+R718 和 FVS780 篩選出活躍的白細(xì)胞，最后使用 CD15hi BV786 和 CD66bhi PE/Fire 640 精確篩選出純中性粒細(xì)胞。在獲得純中性粒細(xì)胞群體后，可以進(jìn)一步分析其下游種群，包括：血液亞群、遷移能力、顆粒釋放、免疫調(diào)節(jié)、罕見亞群、顆粒釋放免疫調(diào)節(jié)、代謝增強(qiáng)（GRIM）和細(xì)胞成熟。

為了深入探究中性粒細(xì)胞表型的個(gè)體差異和細(xì)微特征，研究采集了多種樣本中的中性粒細(xì)胞群體。將每個(gè)樣本的細(xì)胞數(shù)量降采樣至10000個(gè)粒子數(shù)，并運(yùn)用Specter R包進(jìn)行UMAP分析（參考圖2）。這種分析方法可以將高維的單細(xì)胞數(shù)據(jù)映射到低維空間，從而直觀展示不同樣本來源中性粒細(xì)胞的分布情況和特征差異。 

圖2

樣本來源包括供體的全血、經(jīng)遷移刺激但未感染的中性粒細(xì)胞、受銅綠假單胞菌感染且經(jīng)遷移刺激的中性粒細(xì)胞以及健康人的唾液（參考圖3）

圖3

UMAP簇根據(jù)樣本來源進(jìn)行顏色區(qū)分，紫色代表全血，藍(lán)綠色代表未感染但有遷移刺激的中性粒細(xì)胞，紅色代表受銅綠假單胞菌感染且有遷移刺激的中性粒細(xì)胞，綠色代表健康人的唾液。

圖4展示了每個(gè)標(biāo)記物相對(duì)表達(dá)量的熱圖和樹狀圖，通過熱圖可以清晰地看到不同亞群中各標(biāo)記物的表達(dá)水平差異，樹狀圖則有助于分析不同亞群之間的親緣關(guān)系和相似性。

圖4