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細(xì)胞外囊泡（Extracellular Vesicles, EVs）是由細(xì)胞主動(dòng)或被動(dòng)釋放的膜性小泡，廣泛參與細(xì)胞間通訊、生理調(diào)控和疾病進(jìn)程。根據(jù)其生物發(fā)生機(jī)制、大小和內(nèi)容物差異，EVs主要分為三類：外泌體（Exosomes）、微囊泡（Microvesicles, MVs）和凋亡小體（Apoptotic Bodies）。以下是系統(tǒng)總結(jié)：
EVs的分類與特征 | |||
類型 | 外泌體 （Exosomes） | 微囊泡 （MVs） | 凋亡小體 （Apoptotic Bodies） |
來(lái)源 | 多泡體（MVBs）內(nèi)體途徑 | 細(xì)胞膜直接出芽 | 凋亡細(xì)胞膜斷裂 |
大小 | 30–150 nm | 100–1000 nm | 500–2000 nm |
釋放機(jī)制 | 主動(dòng)（ESCRT依賴） | 主動(dòng)（鈣離子/細(xì)胞骨架依賴） | 被動(dòng)（凋亡終末階段） |
標(biāo)志物 | CD9/CD63/CD81/TSG101 | 整合素、ARF6、選擇素 | 磷脂酰絲氨酸、組蛋白、DNA片段 |
內(nèi)容物 | 核酸（miRNA、lncRNA）、信號(hào)蛋白 | 細(xì)胞質(zhì)蛋白、mRNA、脂質(zhì) | 細(xì)胞器碎片、核物質(zhì) |
功能 | 精細(xì)細(xì)胞通訊、免疫調(diào)節(jié) | 病理信號(hào)傳遞（如腫瘤轉(zhuǎn)移） | 凋亡殘骸清除 |
外泌體作為細(xì)胞間通訊的重要媒介，攜帶蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、核酸（如mRNA、miRNA、DNA）等生物活性分子，參與多種生理和病理過(guò)程，能夠動(dòng)態(tài)實(shí)時(shí)地反映母細(xì)胞的生理病理狀態(tài)，這些直徑僅 30-150 nm 的“細(xì)胞間通信大師”，正憑借其在疾病診斷、藥物遞送等領(lǐng)域的潛力，成為生命科學(xué)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。
目前，外泌體應(yīng)用的第一步是分離和純化，不管是從血液、唾液等體液還是細(xì)胞培養(yǎng)上清中獲取外泌體，都需要對(duì)其進(jìn)行分離純化，以去除不需要的雜質(zhì)?；谕饷隗w的尺寸、密度、電荷、組成，已經(jīng)開(kāi)發(fā)出了諸多分離方法，比如超速離心、超濾、尺寸排阻色譜、聚合物沉淀、免疫親和等，這些傳統(tǒng)的分離方法已經(jīng)非常成熟，尤其是超速離心，被譽(yù)為外泌體分離的金標(biāo)準(zhǔn)，為廣大研究者所接受。實(shí)驗(yàn)室和臨床中常用的分離方法多達(dá)十余種，從經(jīng)典的超速離心到前沿的微流控技術(shù)，每種方法都有其獨(dú)特的特點(diǎn)。此文介紹主流方法的優(yōu)缺點(diǎn)和應(yīng)用場(chǎng)景，助你快速找到最適合的分離策略。
原理：利用不同大小顆粒在離心力下的沉降速度差異分離外泌體。
操作：通過(guò)多步離心（如500g→2000g→10,000g→100,000g）逐步去除細(xì)胞、碎片、大囊泡，最終沉淀外泌體。也可結(jié)合蔗糖密度梯度（如12–36%碘克沙醇）可提高純度，分離不同密度囊泡（如EVs與非囊泡顆粒）。
優(yōu)點(diǎn)：技術(shù)成熟，是分離外泌體的“金標(biāo)準(zhǔn)”，適用于多種生物樣本（細(xì)胞培養(yǎng)基、血漿等）；純度高。
缺點(diǎn)：耗時(shí)（需數(shù)小時(shí)至數(shù)天）；設(shè)備成本高（需超速離心機(jī)）；易受操作影響，低回收率，可能導(dǎo)致外泌體損傷。
應(yīng)用場(chǎng)景：適用于基礎(chǔ)研究中高純度外泌體分離。
超速離心法
原理：通過(guò)多孔介質(zhì)按顆粒大小分離，小分子滯留，外泌體（40–150 nm）先被洗脫。
操作：樣本通過(guò)預(yù)裝柱（如qEV柱），收集特定洗脫組分。
優(yōu)點(diǎn)：避免高速離心損傷外泌體，保留生物活性；可分離較高純度外泌體，減少蛋白污染。
缺點(diǎn)：不適合大容量樣本，需專用色譜柱；可能與血清蛋白共洗脫，需后續(xù)濃縮步驟。
尺寸排阻色譜法
原理：通過(guò)孔徑濾膜截留外泌體，去除小分子污染物。
操作：通過(guò)離心力使樣本通過(guò)濾膜，收集截流液。
優(yōu)點(diǎn)：操作簡(jiǎn)單快速，無(wú)需特殊設(shè)備；低速離心驅(qū)動(dòng)下能夠保證外泌體膜的完整性。
缺點(diǎn)：產(chǎn)量低，大分子污染物（如脂蛋白）可能共截留，有膜堵塞的風(fēng)險(xiǎn)。
應(yīng)用場(chǎng)景：大體積原料樣本純化，常與其他方法聯(lián)用（如超速離心）。
原理：利用聚合物（如PEG）降低外泌體溶解度，使其沉淀。
優(yōu)點(diǎn)：操作簡(jiǎn)單，時(shí)間短；可用于處理小體積樣本。
缺點(diǎn)：易共沉淀蛋白質(zhì)、脂蛋白等雜質(zhì)，純度低；聚合物殘留可能干擾下游分析。
應(yīng)用場(chǎng)景：初步富集外泌體，適用于臨床樣本快速處理。
原理：利用抗體（如抗CD63、CD9）或配體（如Tim-4蛋白）特異性結(jié)合外泌體表面標(biāo)志物，通過(guò)磁珠或?qū)游鲋蛛x。
操作：磁珠偶聯(lián)抗體，與樣本孵育后磁分離收集外泌體。
優(yōu)點(diǎn)：高特異性，可分離特定亞群外泌體（如腫瘤來(lái)源外泌體）。
缺點(diǎn)：依賴抗體特異性，成本高，通量低；可能遺漏無(wú)相應(yīng)標(biāo)志物的外泌體亞群。
應(yīng)用場(chǎng)景：靶向分離特定細(xì)胞來(lái)源的外泌體。
免疫親和捕獲法
原理：利用微通道內(nèi)流體力學(xué)特性，按尺寸、電荷分離外泌體。
優(yōu)點(diǎn)：高精度、高通量，可實(shí)現(xiàn)單顆粒分析。
缺點(diǎn)：設(shè)備復(fù)雜，需定制化芯片，成本高。
微流控法
外泌體分離方法的選擇需綜合考慮研究目的、樣本類型及設(shè)備條件。傳統(tǒng)超速離心法仍是高純度分離的金標(biāo)準(zhǔn)，而新興技術(shù)（如微流控）在精準(zhǔn)分析中展現(xiàn)潛力。未來(lái)趨勢(shì)傾向于多方法聯(lián)用（如超速離心 + 免疫捕獲）以兼顧效率與特異性，同時(shí)標(biāo)準(zhǔn)化操作流程（如 MISEV 指南）將推動(dòng)跨研究數(shù)據(jù)可比性。無(wú)論你是實(shí)驗(yàn)室新手還是臨床研究者，選對(duì)分離方法，就能讓外泌體研究事半功倍！
由于文章篇幅及側(cè)重點(diǎn)問(wèn)題，詳細(xì)對(duì)比數(shù)據(jù)并未展示，大家如有需要可自行翻閱下方參考文獻(xiàn)~
參考文獻(xiàn)
1、Zhang Z, Yu K, You Y, Jiang P, Wu Z, DeTure MA, Dickson DW, Ikezu S, Peng J, Ikezu T. Comprehensive characterization of human brain-derived extracellular vesicles using multiple isolation methods： Implications for diagnostic and therapeutic applications. J Extracell Vesicles. 2023 Aug;12(8):e12358. doi: 10.1002/jev2.12358. PMID: 37563857; PMCID: PMC10415636.
2、Tian Y, Gong M, Hu Y, Liu H, Zhang W, Zhang M, Hu X, Aubert D, Zhu S, Wu L, Yan X. Quality and efficiency assessment of six extracellular vesicle isolation methods by nano-flow cytometry. J Extracell Vesicles. 2019 Nov 29;9(1):1697028. doi: 10.1080/20013078.2019.1697028. PMID: 31839906; PMCID: PMC6896440.
3、李帥,劉亞婷,仰大勇.外泌體分離技術(shù)研究進(jìn)展[J].化學(xué)學(xué)報(bào),2025,83(04):428-438.
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